乙醇稀释，制备成待测样品。

根据标准曲线的方法测量样品的吸光度，每个样品3个平行，取三次测定的算术平均值，再按标准曲线计算出苦参提取物的黄酮含量。

2.2.2苦参碱及氧化苦参碱含量

含量测定：HPLC法；

①色谱条件^[6]

色谱柱：Agilent Eclipse plus-C18 (150mm×4.6,5μm)，流动相A：3%磷酸水溶液；流动相B：乙腈；流动相C：无水乙醇；流速：0.50 mL/min，进样量：5 µL，柱温：30 ℃，检测波长：220 nm。

②标准曲线的建立

精密称取苦参碱标准品20mg、氧化苦参碱标准品50mg，精密称定，加乙腈-无水乙醇（80：20）混合溶液，定容至50mL容量瓶中，作为标准品溶液（苦参碱：0.2mg·mL^-1、0.5mg·mL^-1）。分别移取标准品溶液0.5、1.0、2.0、4.0、8.0mL置于25 mL容量瓶中，乙腈-无水乙醇（80：20）混合溶液定容，用0.45 µm滤膜过滤备用；按2.2.2中的色谱条件进行检测标准品含量测定。以质量浓度（c，µg·mL^-1）为横坐标，以峰面积（x）为纵坐标，绘制标准曲线，进行线性回归。

③试样含量测定

准确称取苦参提取物25 mg，乙腈-无水乙醇（80：20）混合溶液定容100 mL，按2.2.2中的色谱条件进行检测，回归方程求得苦参碱及氧化苦参碱含量；并计算各自含量（y，mg/g）。

式中：y—苦参碱及氧化苦参碱得率，mg/g；c—苦参碱或氧化苦参碱的质量浓度，µg·mL^-1；v—提取液体积，mL；n—稀释倍数；m—苦参提取物质量，g。

2.3体外生化试验

2.3.1 酪氨酸酶抑制试验

皮肤色素的形成是由于表皮中黑色素的积累造成的^[7]，黑色素合成过量，会造成皮肤色素沉积，形成色斑，导致肌肤黯沉。一般情况下，酪氨酸酶活性越高，黑色素合成越多。可通过抑制酪氨酸酶活性，来控制黑色素的合成速率^[8]。通过酪氨酸酶活性抑制率，评估物质应用于化妆品中的美白功效，实验反应体系如表1所示。

按照表1的顺序，加样结束后，在25℃下孵育30min，在475nm处测定吸光值。

表1 酪氨酸酶反应体系