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2 试验方法
2.1苦参提取物制备
将苦参根碎粉,过40目筛,准确称取一定量的苦参根,按0.10g·mL-1的生药量提取,加入50%丁二醇水溶液(质量分数),70-75℃热提90min,过滤,即得苦参提取物,4℃冷藏备用。
2.2活性物含量检测
2.2.1黄酮含量
测定方法:采用NaNO2-Al(NO3)3比色法[5]测定。
①溶液配制:
5%NaNO2溶液:称取NaNO2 5.0 g,溶解于100mL去离子水中,置于棕色瓶;10% Al(NO3)3溶液:称取Al(NO3)3•9H2O 17.6 g,溶解于100mL去离子水中,置于棕色瓶;1.0mol·L-1 NaOH溶液:称取4.0 g NaOH固体,加去离子水100mL,混匀备用。
芦丁标准溶液:称取芦丁标准品(C27H30O16·3H20,分子量664.56.25)65.2 mg,用30%乙醇溶解,70℃水浴助溶,放冷并完全转入100 mL容量瓶中,用30%乙醇定容,摇匀得浓度为0.599 mg/mL芦丁标准溶液,备用。
②确定标准曲线:
取7组50mL容量瓶,分别加入0(空白),1.00、2.00、3.00、4.50、6.00和8.00mL芦丁标准溶液,用30%乙醇补至约25 mL,分别加入5% NaNO2溶液1.40mL摇匀,放置5min后分别加入10% Al(NO3)3溶液 1.40mL,摇匀,6 min后再分别加入1.0mol·L-1 NaOH溶液10.00 mL,混匀,用30%乙醇稀释至刻度。20min后于波长510nm处以空白试液做参比测定吸光值。以芦丁标准溶液的理论浓度为纵坐标,平均吸光值为横坐标,制定标准曲线,得出标准曲线的回归方程:Y=AX+B [式中Y为芦丁浓度(mg/mL),X为吸光值]。
③试样测定:
试样配制:准确称取1.0 g苦参提取物试样,用10 mL 30%